二維電泳配合蛋白質譜分析的實驗前後順序，下列何者最適當？①特定酵素水解蛋白 ②一維等電點聚焦電泳 ③膠體染色 ④檢體製備 ⑤二維聚丙烯醯胺凝膠電泳

題目

二維電泳配合蛋白質譜分析的實驗前後順序，下列何者最適當？①特定酵素水解蛋白 ②一維等電點聚焦電泳 ③膠體染色 ④檢體製備 ⑤二維聚丙烯醯胺凝膠電泳 A. ④②⑤③① B. ④①②⑤③ C. ④③①②⑤ D. ①②③⑤④

官方答案

• 答案：A. ④②⑤③①

解析

二維電泳串接質譜的標準流程為：先做檢體製備（④，含溶解、還原、烷化、定量），再依等電點做一維聚焦（②），接著以 SDS-PAGE 依分子量分離（⑤），跑完膠後染色（③）使蛋白點可見，切下目標點後以特定酵素水解成胜肽（①），最後上質譜分析。酵素水解必須在電泳與染色之後，否則蛋白已被切成片段而無法依完整分子量分離，故順序為④②⑤③①。

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官方資料

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