PCR反應中，primer決定了核酸放大的特異性，在設計primer時的考慮，下列何者最適當？

題目

PCR反應中，primer決定了核酸放大的特異性，在設計primer時的考慮，下列何者最適當？ A. primer的secondary structure會減少標的PCR產物合成的產量 B. 調整primer的長度，可改變primer annealing的溫度，溫度最好限制在40～50℃ C. primer 本身的5'端和3'端形成互補時，會形成primer dimer D. primer 的3'端可加上與模板非互補的序列，增加primer的應用性

官方答案

• 答案：A. primer的secondary structure會減少標的PCR產物合成的產量

解析

Primer 設計關鍵：A 正確，primer 若形成髮夾結構或雙股體等二級結構，會消耗有效引子並干擾退火，降低標的產物產量。B 錯誤，annealing 溫度通常設定於 55-65℃，40-50℃ 太低易產生非特異性增幅。C 描述錯誤，primer dimer 主要由兩條引子 3' 端互補配對延伸形成，非單條引子 5' 與 3' 端互補。D 雖 5' 端可加非互補序列（如酵素切位、標籤），但 3' 端必須與模板完全互補才能啟動延伸，3' 端加非互補序列會導致增幅失敗。

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官方資料

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