關於巢式聚合酶連鎖反應（nested PCR）的敘述，下列何者最不適當？

題目

關於巢式聚合酶連鎖反應（nested PCR）的敘述，下列何者最不適當？ A. 是將第一次PCR 反應的產物作為第二次PCR 反應的模板 B. 需設計兩組引子（primer） C. 通常在模板DNA 含量較高時使用 D. 所使用的第二組引子（primer）會結合在第一次PCR 產物的內部

官方答案

• 答案：C. 通常在模板DNA 含量較高時使用

解析

巢式 PCR 是把第一次 PCR 產物稀釋後當作第二次反應的模板，第二組引子設計在第一次產物內部，因此具有兩層增幅與兩層專一性，可大幅提升靈敏度與特異性。正因為目的是「放大微弱訊號」，臨床上用於檢體中病原或目標 DNA 含量極低的情況；若模板含量高，反而容易因過度增幅產生非專一產物與汙染，並無採用巢式 PCR 的必要，故 C 最不適當。

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官方資料

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