民國115年 高考三級 生藥中藥基原鑑定 中藥成分分析考古題
民國115年 高考三級 生藥中藥基原鑑定 中藥成分分析收錄考選部官方試題，共 4 題可線上瀏覽，考選部未公告本科目答案。
題目與答案
中藥品質管制以指標成分含量測定做為評估依據之一。請列出知母、桔
梗和黃耆之主要指標成分為何？並說明此三種中藥材以HPLC-ELSD 進
行指標成分含量測定的原因和特性。（25 分）
參考解答（AI 生成，非官方）
- 一、指標成分之選定原則與知母：知母（Anemarrhenae Rhizoma）主要含雙苯吡酮類之芒果苷（mangiferin）與甾體皂苷類之知母皂苷BII（timosaponin BII），藥典多以兩者作為含量測定指標，分別代表水溶性與皂苷類成分，可兼顧不同極性成分之品質評價。
- 二、桔梗與黃耆：桔梗（Platycodonis Radix）以桔梗皂苷D（platycodin D）為主要指標，屬齊墩果烷型三萜皂苷；黃耆（Astragali Radix）則以黃耆甲苷（astragaloside IV）及毛蕊異黃酮葡萄糖苷（calycosin-7-O-β-D-glucoside）為指標，前者為皂苷、後者為異黃酮，可反映不同類別成分。
- 三、採用HPLC-ELSD之原因：皂苷類多缺乏共軛發色團，在紫外光區僅有末端吸收，以UV偵測器測定時靈敏度低且易受基質干擾；ELSD（evaporative light scattering detector，蒸發光散射偵測器）屬通用型質量偵測器，對無紫外吸收之皂苷、糖類、脂質均可響應，故知母皂苷、桔梗皂苷D、黃耆甲苷宜以HPLC-ELSD測定。
- 四、ELSD之特性與限制：其原理為流出液經霧化、溶劑蒸發後，待測物微粒散射雷射光，訊號強度與質量相關。移動相須具揮發性，不可使用磷酸鹽等不揮發緩衝鹽；漂移管溫度、霧化氣流量與壓力須固定；響應呈非線性，需以對數或分段校正曲線定量；靈敏度通常低於UV，對半揮發性成分回收較差。
- 五、實務要點：樣品多以甲醇或稀甲醇超音波萃取，配合C18管柱與乙腈-水梯度沖洗；同時應執行系統適用性試驗（理論板數、分離度、重複性）與對照品比對，並注意ELSD基線安定需平衡足夠時間，且須以已知量對照品驗證回收率。
中藥材或中藥製劑之成分定量分析方法包括外標準品校正曲線法
（external standard calibration）、內標準法（internal standard method）及
標準添加法（standard addition method）。請分別說明此三種方法之原理，
並說明在中藥成分分析中之應用。（25 分）
參考解答（AI 生成，非官方）
- 一、外標準品校正曲線法（external standard calibration）原理：配製一系列已知濃度之對照品溶液，於相同條件下注入，以峰面積或峰高對濃度作圖得校正曲線，再依樣品峰面積回歸求得濃度，乘上稀釋倍數與樣品量即得含量。其前提為樣品與標準品之響應因子一致、進樣量準確且基質影響可忽略。
- 二、內標準法（internal standard method）原理：於樣品與標準品溶液中加入固定量之內部標準品，以「待測物峰面積／內標峰面積」之比值對濃度作圖。內標可補償進樣體積誤差、前處理損失與儀器訊號漂移，適用於前處理步驟多、體積不易控制或無自動進樣器之情形。
- 三、標準添加法（standard addition method）原理：將樣品均分數份，分別加入不同已知量之待測物標準品，稀釋至同體積後測定，以添加量對訊號作圖，外推至訊號為零即得原含量。此法可抵銷基質效應（matrix effect），適用於基質複雜且無空白基質可用之中藥材或製劑。
- 四、在中藥成分分析之應用：外標準法為藥典含量測定之常規作法，操作簡便，適用於成分明確、基質較單純者；內標法常用於GC、LC-MS/MS多成分同時定量與生物檢體分析，內標宜選結構類似之同位素標誌物；標準添加法則用於基質抑制明顯之情形，如LC-MS/MS離子抑制嚴重時。
- 五、限制與選用：外標準法易受基質效應與進樣誤差影響；內標法須選擇不與樣品成分重疊且安定之化合物；標準添加法耗時、樣品用量多且通常僅適用單一成分。實務上應依基質複雜度、儀器特性與法規要求選用，並以線性、回收率、精密度與偵測極限完成方法確效。
針對非無菌產品的微生物檢驗時，進行微生物計數方法之目的為何？並
說明檢測樣品有不同物理特性時，其不同檢品適用的微生物計數之製備
方法。（25 分）
參考解答（AI 生成，非官方）
- 一、微生物計數之目的：非無菌產品之微生物計數在測定好氧菌總數（TAMC）與酵母菌及黴菌總數（TYMC），用以判定原料、製程與儲存之衛生狀況，作為品質規格、安定性試驗與製程確效之依據，並供後續特定病原菌檢出試驗之參考。
- 二、方法概述：常用平板計數法（pour plate、spread plate）、薄膜過濾法（membrane filtration）與最確數法（MPN）。培養基如大豆酪蛋白消化瓊脂、沙氏葡萄糖瓊脂，培養溫度與時間依藥典規定，例如30至35℃及20至25℃。
- 三、檢品製備之通則：以pH 7.0氯化鈉蛋白腖緩衝液或磷酸鹽緩衝液為稀釋液，加入聚山梨酯80（polysorbate 80）等界面活性劑幫助分散；固體檢品先粉碎或均質，使成均勻懸浮液，再作十倍系列稀釋後接種。
- 四、依物理特性分類之製備：水溶性液體可直接稀釋或行薄膜過濾；非水溶性液體如油類、軟膏，先加適當乳化劑或加熱溶解後稀釋；乳膏、乳劑以含乳化劑之稀釋液均質破乳；膜劑、貼布以無菌剪刀剪碎後振搖萃取；固體粉末則均質後稀釋。
- 五、注意事項：稀釋液與培養基須經無菌試驗；檢品具抗菌性時，應以稀釋、薄膜過濾沖洗或添加中和劑（如卵磷脂、聚山梨酯80）去除抑制；每批應作方法適用性試驗，確認回收率與重複性符合規定，避免誤判。
請寫出常用中藥有效成分或指標成分的純度檢測方法。（25 分）
參考解答（AI 生成，非官方）
- 一、色譜純度法：以高效液相層析（HPLC）搭配光二極體陣列偵測器（DAD），比較主峰與對照品之光譜相似度及峰純度參數（peak purity、純度角、閾值），並以面積歸一化法（area normalization）計算純度百分比；必要時以不同波長與不同管柱雙重確認。
- 二、色譜分離法：薄層層析（TLC）檢查雜質斑點、HPLC有關物質檢查（related substances）、氣相層析（GC）用於揮發性成分；並以滯留時間、相對滯留時間與對照品比對定性，評估分離度與雜質限量。
- 三、光譜與質譜法：紅外光譜（IR）比對特徵吸收、紫外光譜（UV）比較最大吸收波長與吸收係數、質譜（MS、LC-MS/MS）確認分子量與碎片離子；核磁共振（NMR）尤其是定量核磁共振（qNMR），可作為絕對純度測定之一級方法。
- 四、理化常數與限量檢查：熔點、比旋光度、折射率、乾燥減重、熾灼殘渣（灰分）、酸不溶性灰分；並檢測重金屬與元素不純物（ICP-MS）、農藥殘留（GC-MS/MS、LC-MS/MS）、黃麴毒素、二氧化硫等項目。
- 五、綜合判定：單一方法難以涵蓋所有雜質，宜採「色譜＋光譜＋理化常數」多重策略；純度值應註明方法與基準（如以乾品計、面積百分比或質量平衡法），並以對照品、重複性與不確定度評估結果之可信度。