銀杏葉提取物之總黃酮醇苷不得少於24.0%，其含量測定係將檢品35 mg 加甲醇-25%鹽酸溶液（4：1）的混合溶液25 mL，置水浴中加熱迴流30 分鐘，迅速…

題目

銀杏葉提取物之總黃酮醇苷不得少於24.0%，其含量測定係將檢品35 mg 加甲醇-25%鹽酸溶液（4：1）的混合溶液25 mL，置水浴中加熱迴流30 分鐘，迅速冷卻至室溫，轉移至50 mL 量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖 勻，濾過，取續濾液，即得檢品溶液。以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充 劑；以甲醇-0.4%磷酸溶液（50：50）為流動相；檢測波長為360 nm。理 論板數按槲皮素峰計算應不低於2500。以槲皮素對照品的峰面積為對 照，分別按下表相對應的校正因子計算槲皮素、山柰素和異鼠李素的含 量，用待測成分色譜峰與槲皮素色譜峰的相對滯留時間確定槲皮素、山 柰素和異鼠李素的峰位，其相對滯留時間應在規定值的 5%範圍內（若 相對滯留時間偏離超過5%，則應以相應的被替代對照品確證為準）。相 對滯留時間及校正因子（F）見下表： 待測成分（峰） 相對滯留時間 校正因子（F） 槲皮素（quercetin） 1.00 1.0000 山柰素（kaempferol） 1.77 1.0020 異鼠李素（isorhamnetin） 2.00 1.0890 總黃酮醇苷含量=（槲皮素含量+山柰素含量+異鼠李素含量）×2.51 試說明：（每小題6 分，共30 分） 檢品採用甲醇-25%鹽酸溶液（4：1）加熱迴流之原因。 為何只使用槲皮素對照品卻可同時定量槲皮素、山柰素和異鼠李素3 種成分？ 總黃酮醇苷含量計算以上述3 種成分量總合乘以2.51 的可能原因。 根據以上層析條件等資訊說明槲皮素、山柰素和異鼠李素3 種成分的 極性大小。 以上條件如何進行方法確效？

參考解答（AI 生成，非官方）

• 一、水解目的與操作：檢品以甲醇-25%鹽酸（4：1）加熱迴流30分鐘，係酸催化水解（acid hydrolysis），將銀杏葉中以芸香糖苷（rutinoside）等雙糖苷形式存在的黃酮醇苷，水解切除糖基，游離出槲皮素、山柰素與異鼠李素三種苷元。甲醇兼具溶解苷元與均勻傳熱之效，迴流維持沸騰使水解完全，迅速冷卻後以甲醇定容，可避免鹽酸揮散及體積誤差；水解不完全將使結果偏低。
• 二、單一對照品之原理：三種苷元同屬黃酮醇（flavonol），具相同母核與相近吸收光譜，在360 nm均有強吸收，故可用槲皮素為外標（external standard），再以校正因子F修正各成分因分子量與摩爾吸光係數差異造成之響應差。F值分別為1.0000、1.0020、1.0890，接近1，顯示響應相近；峰位則以相對滯留時間（relative retention time, RRT）定性，槲皮素1.00、山柰素1.77、異鼠李素2.00，實測值須在規定值±5%內，偏離超過5%應以相應對照品確證，此即單標對照、多峰定量之設計。
• 三、乘以2.51之原因：2.51為苷元換算為苷之平均轉換因子，約等於黃酮醇苷平均分子量756.7與苷元平均分子量301.7之比值。銀杏葉黃酮多以雙糖苷存在，分子量約為苷元之2.5倍，故以三種苷元總和乘2.51，估得總黃酮醇苷含量，屬「以苷元表示苷」之換算，並非實際測得糖苷；此舉可避免逐一定量各別糖苷之困難，但水解完全性與換算因子適用性為關鍵。
• 四、極性判定：在十八烷基矽烷鍵合矽膠（C18）逆相層析、甲醇-0.4%磷酸（50：50）條件下，極性大者先流出。滯留時間槲皮素1.00＜山柰素1.77＜異鼠李素2.00，故極性為槲皮素＞山柰素＞異鼠李素。槲皮素B環具3'-OH與4'-OH；山柰素缺少3'-OH；異鼠李素3'位為甲氧基，遮蔽羥基、疏水性最強，故最晚流出。磷酸可抑制酚羥基解離、改善峰形。
• 五、方法確效：依ICH Q2(R1)與藥典規範，應執行專一性（峰純度、分離度）、線性與範圍（槲皮素檢量線）、準確度（添加回收率）、精密度（重複性、中間精密度）、偵測極限與定量極限、溶液穩定性及韌性（流動相比例、磷酸濃度、流速、柱溫、不同批次管柱）。系統適用性另要求理論板數按槲皮素峰計算不低於2500、分離度與拖尾因子合格、RRT在±5%內，並應驗證校正因子之適用性。
• 六、答題提醒：本題五小題各6分，宜分點對應，先寫原理再寫操作參數，最後補述限制（如水解過度可能造成苷元降解、校正因子僅在特定波長與條件下有效），以展現分析化學思維。

AI 依官方試題文字產生的參考解答，非考選部公告答案，內容僅供備考參考。

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